[생물학 실험] 단백질의 정량

2021.03.01 23:05

올레포트 조회 수:10

단백질의 정량.hwp

1. 자료설명


생물학 및 실험 과목에서 A+ 받았던 레포트입니다.



사용한 실험 방법에 대한 이론적인 배경 설명,

실험결과에 대한 해석,

예상결과에 다른 결과가 나온 이유에 대한 고찰,

수정방안 등을 위주로 작성하였습니다.



유용하게 사용하시길 바랍니다.

2. 목차 및 본문내용


Ⅰ. 실험방법

1) 15ml tube에 단백질의 양을 모르는 시료(milk)를 증류수 (dH20)를 이용, serial dilution 하여 다음과 같이 희석하여 제조한다. 마지막 부피가 1ml이 되도록 희석한다.



Sample No

A(1/10)

B(1/100)

C(1/1000)

Sample

-

-

-

dH2O

900㎕

990㎕

999㎕

Milk

100㎕

10㎕

1㎕

Total

1,000㎕

1,000㎕

1,000㎕





2) 각각의 희석된 시료를 1.5ml 시험관(Eppendorf tube) 에 50㎕씩 넣는다.



3) 단백질의 양을 알고 있는 Standard solution (1mg/ml BSA, bovine serum albumin)을 1.5ml tube에 다음과 같이 각각 넣는다.



Standard No.

1

2

3

4

5

dH2O

1000㎕

900㎕

800㎕

600㎕

200㎕

1mg/ml BSA

0㎕

100㎕

200㎕

400㎕

800㎕

Total

1000㎕

1000㎕

1000㎕

1000㎕

1000㎕





4) 큐벳에 Bradford reagent 800㎕ 를 넣고 각각의 Standard tube와 시료 (희석된 우유)를 2㎕ 씩 넣어 잘 섞어준 뒤 발색이 되도록 기다린다.



5) 595nm의 파장에서 standard solution 과 시료의 흡광도를 측정하여 기록하고, 측정값을 이용하여 BSA standard curve를 작성한 후 (y축 : absorbance, x축 : protein 농도, mg/ml) 각 sample의 흡광도 값을 찾아서 sample들의 protein 농도를 추정한다.

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